蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)是生物實(shí)驗(yàn)室用于分離、提純蛋白質(zhì)的核心設(shè)備,通過結(jié)合層析技術(shù),實(shí)現(xiàn)從細(xì)胞裂解液、發(fā)酵液等復(fù)雜樣品中獲取高純度目標(biāo)蛋白的目的,廣泛應(yīng)用于生物制藥、酶工程、分子生物學(xué)研究等領(lǐng)域。
蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)的組成:
高壓泵:提供準(zhǔn)確的流速控制,確保樣品在層析柱中的穩(wěn)定流動(dòng)。
層析柱:填充有特定介質(zhì),根據(jù)蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)實(shí)現(xiàn)分離。
檢測器:集成連續(xù)波長紫外檢測器、電導(dǎo)檢測器,支持多波長同步監(jiān)測,實(shí)時(shí)跟蹤蛋白質(zhì)的洗脫過程。
收集器:自動(dòng)收集洗脫峰對應(yīng)的組分,分為分管收集和峰收集兩種模式,可設(shè)定收集體積、峰閾值等參數(shù),避免目標(biāo)蛋白損失。
控制軟件:內(nèi)置層析方法數(shù)據(jù)庫,支持簡易編程、專家輔助軟件及數(shù)據(jù)自動(dòng)處理,生成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
工作原理:
基于層析技術(shù),利用不同填料對生物分子的吸附差異實(shí)現(xiàn)分離。例如,凝膠過濾層析根據(jù)分子大小分離蛋白質(zhì),離子交換層析根據(jù)電荷性質(zhì)分離,親和層析則利用目標(biāo)蛋白質(zhì)與特定配體的特異性結(jié)合進(jìn)行純化。
日常操作規(guī)范
實(shí)驗(yàn)前需用去離子水沖洗整個(gè)流路,平衡層析柱至基線穩(wěn)定后再進(jìn)樣;流動(dòng)相需經(jīng) 0.22 μm 濾膜過濾并脫氣,避免氣泡影響檢測和柱效。
梯度洗脫時(shí),避免流動(dòng)相 pH 值或鹽濃度突變,防止目標(biāo)蛋白變性或?qū)游鼋橘|(zhì)損壞。
實(shí)驗(yàn)后立即用合適的洗脫液沖洗層析柱,再用去離子水或保存液平衡,密封后冷藏保存。